Evaluación de los efectos de la criopreservación sobre corion de mucosa oral artificial generado por ingeniería tisular.

Abstract

El objetivo de esta tesis doctoral fue realizar un análisis macroestructural, histológico, de viabilidad celular y de propiedades biomecánicas para sustitutos de corion de mucosa oral generados mediante ingeniería tisular cuando los mismos son sometidos a procesos de criopreservación utilizando distintas soluciones crioprotectoras. Se criopreservaron durante 7 días sustitutos de corion de mucosa oral a base de fibrina y agarosa con fibroblastos gingivales humanos criopreservados con las soluciones crioprotectoras A (Medio TC-199, DMSO 15 %, Albúmina), B (DMEM, SBF, DMSO 10 %) y C (Medio QC , Glicerol). Los controles fueron sustitutos de corion no criopreservados (CF) y sustitutos preservados sin solución crioprotectora (CS). Los resultados del análisis macroestructural muestran que la forma y la consistencia en gel de los sustitutos criopreservados con las distintas soluciones protectoras se asemejan a CF. El análisis histológico mediante microscopía óptica reveló que la solución A y B mantiene un patrón de porosidad similar a los valores de CF. Al evaluar el número de células intactas en la matriz de fibrina y agarosa los sustitutos crioprotegidos con la solución B mostraron mejores resultados. La viabilidad celular mediante el estudio inmunohistoquímico PCNA mostró que el índice de proliferación celular fue mayor en los sustitutos criopreservados con la solución B. El método de recultivación y su análisis de viabilidad por la técnica de Live & Dead destacó la mayor proliferación de células con la solución B. El método de exclusión vital de azul tripán y Live & Dead mostraron un alto porcentaje de viabilidad celular en los sustitutos crioprotegidos. El control CS fue el que mostró las mayores alteraciones en todos los análisis realizados. El análisis de las propiedades biomecánicas mostró que los sustitutos criopreservados con las distintas soluciones mostraron parámetros reológicos (esfuerzo umbral, módulo elástico, módulo viscoso) apropiados para su uso en medicina regenerativa. Conclusión: los resultados han permitido establecer patrones de criopreservación para todas las situaciones experimentales destacando a la solución B (DMEM, SBF, DMSO 10 %) como el mejor crioprotector para la criopreservación de sustitutos de corion de mucosa oral a base de fibrina y agarosa. Palabras claves: criopreservación, ingeniería tisular, fibroblastos gingivales humanos, crioprotectores.