Modulación de la actividad enzimática de la acetilcolinestarasa eritrocitaria bovina (AEB) en membranas naturales transferidas a filmes de Langmuir-Blodgett (LB)

Abstract

La actividad de enzimas integrales de membranas puede ser modulada por cambios en el entorno molecular, como por ejemplo cambios en la microviscosidad, la curvatura y la organización dipolar. La AEB es una enzima anclada a la membrana plasmática que cataliza la hidrólisis del neurotransmisor acetilcolina, el cual se hidroliza rápidamente en colina y ácido acético. AEB es un dímero cuyas subunidades catalíticas son idénticas , con una masa molecular aparente de 77 kDa (cada monómero), unidas por puentes disulfuro. Ambas subunidades contienen un anclaje hidrofóbico de tipo glicofosfatidilinositol (GPI). En el presente trabajo, se prepararon capas monomoleculares en la interfase agua-aire a partir de membranas eritrocitarias bovinas purificadas (MEB). La suspensión acuosa de membrana fue dispersada en la interfase aire-agua y se estudiaron las propiedades reológicas de las monocapas obtenidas. Estas monocapas se transfirieron a soportes hidrofóbicos planos (LBMEB ) a dos presiones laterales (π), 10 mN/m (LBMEB.10) y 35 mN/m (LBMEB.35), y fueron utilizados como fuente de enzima para estudiar la cinética de hidrólisis del sustrato artificial acetiltiocolina a 37ºC. El objetivo del proyecto es aplicar los filmes de LBMEB como método de concentración del parásito Anaplasma marginale, y estudiar su efecto sobre la actividad catalítica de la AEB, como posible método de diagnóstico de la anaplasmosis en la etapa crónica de la enfermedad.