Determinación de tirotrofina en sangre seca en papel de filtro por electroquimioluminiscencia
Abstract
El hipotiroidismo congénito (HC) es la causa más frecuente de retraso mental prevenible en el recién nacido. La pesquisa neonatal del HC en Argentina consiste en la medición de tirotrofina (TSH) en sangre seca en papel de filtro (DBS), idealmente entre el segundo y quinto día de vida. Para ello se utilizan plataformas específicas como ELISA y DELFIA, no siempre accesibles a todos los laboratorios. El presente trabajo propone una adaptación de la medición de TSH en DBS por electroquimioluminiscencia (EQLIA), un método ampliamente disponible en los laboratorios, que permitiría acortar los tiempos de procesamiento de muestras para pesquisa neonatal. Se desarrolló un procedimiento de trabajo evaluando distintos tipos de eluyentes, tiempos de elución y cantidad de muestra a utilizar. Para expresar los resultados en μUI/mL de suero se utilizó un factor teórico de 162 que tiene en cuenta la dilución empleada durante la extracción y la capacidad de absorción del disco en DBS. Se determinaron parámetros analíticos tales como linealidad, límite de detección, precisión y exactitud, y se comparó el método evaluado con los métodos disponibles en el laboratorio: ELISA ZenTech y DELFIA PerkinElmer, así como su utilidad clínica. Para el procedimiento de trabajo se utilizó 250 μL de diluyente universal de Roche, un disco de 3 mm de la muestra en DBS y luego de 2 horas de agitación se midió por EQLIA en Cobas e6000 de Roche. El método fue lineal en el rango evaluado hasta una concentración de 220 μUI/mL de suero, con un límite de detección de 1,28 μUI/mL de suero. Asimismo, los coeficientes de variación intra e inter ensayo fueron comparables a los determinados por el fabricante y el método verificó para veracidad según la guía EP15A2. Se obtuvo buena correlación del método EQLIA con ELISA (Coef. de correlación: 0,95) y con DELFIA (Coef. de correlación: 0,88). En relación a la utilidad clínica, cuando se utiliza un valor de corte de 14,58 μUI/mL, equivalente a un percentilo 97,5 en suero para neonatos entre el primer y quinto día de vida, todos los resultados elevados por ELISA y DELFIA fueron también elevados por EQLIA. La adaptación de EQLIA como método de rutina para medir TSH en DBS propone una valiosa herramienta que acortaría los tiempos de procesamiento de muestras para pesquisa neonatal.