Impacto de la terapia con un agonista de toll like receptor 3 sobre el infiltrado inmunológico en un modelo murino de cáncer
Abstract
Durante la realización de la presente tesis doctoral se estudió en profundidad el impacto, sobre el infiltrado inmunológico en el sitio del tumor, de una inmunoterapia antitumoral basada en la utilización del ARNdc, poli A:U (Ácido Poliadenílico-Poliuridílico) como ligando sintético del receptor innato TLR3. Trabajos previos del grupo han demostrado que el tratamiento peritumoral con poli A:U inhibe el crecimiento tumoral y el peso tumoral en ratones portadores del melanoma murino B16-OVA. En primera instancia detectamos las células que expresan el receptor TLR3 en el microambiente tumoral utilizando ratones reporteros TLR3-GFP. Hemos identificado a las células dendríticas (CDs) como la principal célula capaz de detectar este ARNdc, al expresar el receptor TLR3. A su vez, hemos determinado dos subtipos de CDs con distinta expresión del receptor; las CDs CD103+ migratorias expresan en su totalidad TLR3, mientras que las CDs CD11b+ residentes lo hacen en menor medida. Dichas CDs son las células blanco para poli A:U que desencadenan los efectos antitumorales del tratamiento. Al caracterizar el infiltrado inmunológico determinamos un menor número de CDs CD103+ y CDs CD11b+ luego del tratamiento, pero las mismas presentaban un estado de activación mucho mayor (CDs CD86+) que en animales control no tratados. En el caso de macrófagos asociados a tumor, determinamos una disminución en el número de los subtipos M1-like y M2-like luego del tratamiento, siendo estos últimos una fuente importante de la citocina protumoral IL-10. Al estudiar células derivadas de monocitos en tumor (células que darán origen a macrófagos y CDs intratumorales), no detectamos cambios en su número, pero sí en su fenotipo luego del tratamiento. Poli A:U indujo un aumento en la cantidad de monocitos MHCII- productores de TNF (Tumour Necrosis Factor), citocina que participa en la eficacia del tratamiento, al perderse parcialmente el efecto de control de crecimiento tumoral en animales incapaces de detectar dicha citocina proinflamatoria (TNFRp55-/-). Por otro lado, se detectó un aumento en el porcentaje de monocitos MHCII- que expresan el ligando inhibitorio PD-L1, lo cual sumando a lo anterior otorga evidencia de un estado más activado de estos monocitos luego del tratamiento. Ya ha sido descripta la inducción de interferones tipo I (IFN-I) por parte de poli A:U: las CDs TLR3+ serían la principal fuente de los mismos, que son esenciales para la eficacia del tratamiento, que se perdió en ratones deficientes para el receptor de IFN-I (IFNAR1-/-). Valiéndonos de estos animales, pudimos definir cómo los IFN-I median algunos de los efectos del tratamiento, como la disminución en las poblaciones ya descriptas y el aumento de PD-L1 en monocitos MHCII-. Las CDs con fenotipo más activado son capaces de montar una respuesta inmune adaptativa más robusta. En este sentido, hemos observado un aumento muy marcado de linfocitos T CD8+ citotóxicos luego del tratamiento, acompañado por cambios fenotípicos asociados a una mayor capacidad antitumoral (aumento en granzima B capaz de inducir muerte en células neoplásicas). Además, hemos determinado un aumento en linfocitos T CD8+ específicos para el antígeno tumoral modelo OVA luego del tratamiento. Este aumento llevó a un cambio en la relación Treg/CD8 beneficioso, ya que los linfocitos T regulatorios (Treg) son considerados protumorales al inhibir la proliferación de los efectores CD8+ citotóxicos. Por otro lado, evidenciamos un aumento en moléculas citotóxicas (granzima B) dentro de células NK, otra población con capacidad de inducir muerte de las células tumorales, acompañado por cambios fenotípicos asociados a un perfil más maduro y activo de estas células (células NK KLRG1+). Por todo lo anterior, podemos concluir que la administración de poli A:U como ligando de TLR3 tiene un claro efecto terapéutico, mediado principalmente por los IFN-I generados, que impactan sobre las distintas poblaciones celulares inmunes asociadas a tumor. Nuestros hallazgos aportan conocimientos acerca del impacto de TLR3 sobre el desarrollo tumoral y la utilización de sus ligandos como terapia, con la descripción de los efectos sobre las distintas poblaciones que pueden ser tomadas en cuenta a la hora de diseñar terapias combinadas con otros principios activos, para poder potenciar aún más los enfoques inmunoterapeúticos actuales contra el cáncer.