Linfocitos Th1, Th17 y T regulatorios en cepas de ratones con diferente susceptibilidad al desarrollo de prostatitis autoinmune experimental : rol del Receptor

Abstract

El modelo de Prostatitis Autoinmune Experimental (PAE) es considerado una herramienta útil para el estudio de la enfermedad humana Prostatitis Crónica, Síndrome del dolor pélvico crónico (CP/CPPS), una de las enfermedades más prevalentes en la clínica urológica masculina en la que se postula una etiología autoinmune. En la presente tesis se trabajó con este modelo animal analizando en primer lugar los perfiles de activación de los linfocitos T (LT) específicos que se inducen luego de la inmunización de ratones de diferentes cepas con antígenos prostáticos. Se estudiaron cepas con distinta susceptibilidad a desarrollar PAE: las cepas NOD (alta susceptibilidad), C57Bl/6 (susceptibilidad media) y BALB/c (resistente). A pesar que las tres cepas desarrollaron una respuesta inmune celular específica hacia antígenos prostáticos luego de la inmunización, la lesión del órgano blanco se observó principalmente en la cepa NOD y en menor medida en la cepa C57Bl/6, encontrándose ausente en ratones de la cepa BALB/c. Ratones de las cepas NOD y C57Bl/6 presentaron importantes cantidades de LT infiltrando la próstata y la presencia en periferia de una respuesta celular específica asociada a un fenotipo Th1/Th17, con bajos niveles de células Tr1 y Treg (Foxp3+). La cepa resistente BALB/c, mostró muy escasa infiltración en la próstata compuesta principalmente por monocitos/macrófagos con una respuesta celular periférica específica asociada principalmente al fenotipo Th17, con frecuencias elevadas de células regulatorias Tr1 y Treg. Al inmunizar ratones de la cepa NOD deficiente en IFNγ (NOD-IFNγ-/-) se observó una ausencia de infiltrado prostático en presencia de una respuesta celular específica periférica con un perfil dominante Th17 y con una moderada frecuencia de células Tr1 y Treg. Cuando evaluamos los niveles de linfocitos Treg y LT efectores (Tef) se observaron valores de Treg similares en todas las cepas, con niveles significativamente mayores de Tef en las cepas susceptibles. La eliminación transitoria de células Treg previo a la inmunización favoreció el desarrollo de LT específicos con perfil Th1 en las tres primeras cepas, perfil que se asoció con una mayor infiltración y lesión prostática. La eliminación de células Treg en ratones NOD-IFNγ-/- , en los que el perfil Th1 no puede ser inducido, generó un aumento importante de LT específicos con un perfil Th17, sin modificar la infiltración leucocitaria y/o lesión en el tejido prostático. Cuando ratones NOD-IFNγ-/- fueron inyectados por vía intraperitoneal (i.p.) con IFNγ recombinante (rIFNγ) se observó un incremento importante en la infiltración prostática, indicando que no era necesario que los LT secreten IFNγ para infiltrar la glándula. Estos resultados sugirieron que el IFNγ podría jugar un rol importante en el control de la migración de los LT específicos hacia el tejido prostático. El análisis de la expresión de receptores de quimiocinas en LT específicos de las diferentes cepas demostró que LT de ratones NOD y C57Bl/6 tenían un alta frecuencia de células CXCR3+CCR5+, mientras que los LT provenientes de ratones BALB/c y NOD-IFNγ-/- expresaban principalmente CCR6+. Para determinar si la expresión diferencial de receptores de quimiocinas le otorgaba a los LT específicos diferentes capacidades migratorias, LT específicos de ratones NOD o NOD-IFNγ-/- fueron purificados y transferidos adoptivamente a ratones receptores NOD-SCID. Al evaluar la recirculación y la capacidad de llegar al tejido prostático se observó que sólo los LT provenientes de ratones NOD eran capaces de llegar a la glándula prostática de los animales receptores e inducir además reclutamiento de células inmunes. LT específicos de ratones NOD-IFNγ-/- re-estimulados in vitro con el autoantígeno en presencia de rIFNγ presentaron una clara inducción de los receptores CXCR3+CCR5+. Al transferir adoptivamente estos LT estimulados in vitro en presencia de rIFNγ se demostró una infiltración marcada y reclutamiento de otras células inmunes en próstata de ratones receptores. Se realizaron además transferencias adoptivas de LT específicos CD3+CXCR3- o CD3+CXCR3+ y se demostró una capacidad mayor de llegar a próstata e infiltrar en los LT CXCR3+. Además el bloqueo in vivo de los receptores CXCR3 y CCR5 mediante el uso de un péptido antagonista mimético inhibió significativamente la llegada de LT específicos a la glándula prostática. En concordancia con los hallazgos obtenidos en relación a receptores de quimiocinas involucrados en PAE, se demostró una expresión basal de quimiocinas ligandos de CXCR3 y CCR5 en próstata de la cepa susceptible y un incremento marcado de las mismas luego de la instauración de la enfermedad. Nuestros hallazgos demuestran que la expresión de los receptores CXCR3 y CCR5 en la superficie de los LT es esencial para conferirle a estos la capacidad de alcanzar el tejido prostático e inducir un microambiente que genere el reclutamiento de un mayor número de células. Estos resultados podrían ser significativos para el diseño de nuevas terapias que resulten efectivas para bloquear o favorecer la llegada de células inmunes al tejido prostático en procesos autoinmunes o infecciosos/neoplásicos.