Ciclo replicativo de miembros del complejo de Encefalitis Equina Venezolana: la clave para esclarecer aspectos críticos de su patogénesis
Date
2022-09-28Author
Piris, Franco Martín
Advisor
Ghietto, Lucía María
Metadata
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El complejo de Encefalitis Equina Venezolana (VEE) es uno de los serogrupos en los que se clasifican los Alphavirus del Nuevo Mundo. Son transmitidos por vectores hematófagos y causan brotes periódicos en América de Sur, tanto en caballos como en humanos. El objetivo general de la tesina fue caracterizar el ciclo de replicación del virus Pixuna (PIXV) y del virus Rio Negro (RNV) en células Vero mediante diferentes técnicas: ensayo de placa, RT-qPCR e inmunofluorescencia. En primer lugar, se adaptó el RNV a cultivos de células Vero. Posteriormente, y a partir de los resultados obtenidos, se describió el curso temporal de la infección, donde se observó que el intervalo de tiempo desde la infección hasta el comienzo de la fase estacionaria, tanto para el PIXV como para el RNV es de 24 horas, representando el tiempo requerido para completar la curva de crecimiento viral. Las primeras 4 horas postinfección (hpi) corresponden a la fase eclipse, donde el virus ingresa a la célula y se produce el desnudamiento de los viriones. Posterior a esta, desde las 4 hasta las 24 hpi, la infección progresa hacia una etapa de crecimiento rápido llamada fase exponencial, donde se observa el máximo rendimiento viral cuantificado, tanto por unidades formadoras de placa a partir de sobrenadantes de cultivo (virus extracelular), como por copias de ARN viral a partir de monocapas y sobrenadantes (virus intra y extracelular). Por la técnica de inmunofluorescencia, las proteínas virales comienzan a visualizarse a partir de las 6 hpi, coincidiendo con la traducción, maduración y ensamblaje. Finalmente, se observa la fase estacionaria donde todas las células han sido infectadas y comienzan a morirse. Este trabajo es de gran importancia ya que se caracterizó por primera vez la dinámica de crecimiento del RNV en cultivos de células Vero y se complementó el estudio del curso temporal de la infección del PIXV mediante un ensayo de RT-PCR en tiempo real desarrollado y optimizado en este trabajo .
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