Caracterización genotípica de cepas de Mycobacterium tuberculosis aisladas de muestras clínicas de personas privadas de la libertad en una cárcel de Córdoba, Argentina
Abstract
Resumen: La tuberculosis (TB) sigue siendo una enfermedad frecuente y grave en el Siglo XXI. Las cárceles son
instituciones con altos números de casos de TB debido a
sus condiciones de higiene y habitabilidad. El conocimiento acabado de las cepas circulantes en las cárceles puede
colaborar al mayor entendimiento y control de la
enfermedad. Se realizó un estudio descriptivo, observacional, transversal y retrospectivo. Se incluyó en el
muestreo ocho cepas de Mycobacterium tuberculosis
recuperadas de muestras clínicas de personas privadas de
la libertad en la cárcel de Bouwer, Córdoba, Argentina y
atendidas en el Hospital Rawson de Córdoba en el
período desde enero de 2010 hasta julio de 2017. Se
realizó examen directo y cultivo de las muestras en el
Laboratorio de la División Microbiología del Hospital
Rawson de Córdoba. La identi cación de género y especie
se condujo en el Laboratorio Regional de la Tuberculosis,
Hospital Tránsito Cáceres de Allende, Córdoba. La
genotipi cación se realizó en el Servicio Micobacterias de
la Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de
Salud “Dr. Carlos G. Malbrán” (A.N.L.I.S.), Ciudad Autónoma
de Buenos Aires. Cuatro cepas tuvieron un 100% de
homología entre sí, una cepa estaba altamente relacionada con las anteriores y tres cepas correspondían a
genotipos no relacionados con los primeros ni entre sí. Es
necesario ampliar el número de aislamientos estudiados y
realizar un estudio epidemiológico profundo a los nes de
poder trazar la cadena epidemiológica de la TB dentro de
la cárcel a n de optimizar los programas de control de la
Introducción: La tuberculosis (TB) en el siglo XXI sigue
siendo una enfermedad frecuente y grave a pesar de ser
bien conocida, poder ser prevenida y existir técnicas de
diagnóstico y tratamiento efectivas1. Afecta principalmente a grupos económicamente desfavorecidos y
socialmente marginados por lo que su tasa de incidencia
es muy elevada en países y regiones de escasos recursos,
especialmente en las grandes ciudades e instituciones
cerradas2.
Las cárceles son reconocidas internacionalmente como
instituciones con alto número de casos de TB donde la
transmisión está determinada por el contacto entre
internos, personal y/o contactos externos enfermos con
otros sanos2,3,4. El hacinamiento, la mala ventilación, la
falta de exposición a la luz natural y, en muchos casos, la
falla en la implementación de programas institucionales
efectivos de control de la TB en este tipo de instituciones
constituyen factores determinantes para la propagación
de la enfermedad en el ámbito carcelario5,6,7.
La incidencia de TB en prisiones de América Latina es 22,2
veces mayor que en la población general lo cual las
constituye en sitios de reservorio, concentración y
diseminación de la enfermedad5,8.
El acabado conocimiento de las cepas de M. tuberculosis
circulantes en las cárceles, así como el mejoramiento de
las condiciones de reclusión y la correcta implementación
de programas institucionales de control y manejo de la TB
pueden colaborar en la contención de la enfermedad
tanto en los centros penitenciarios como en las comunidades en que se enclavan9,10.
La genotipi cación de los aislamientos de M. tuberculosis
contribuye al establecimiento de vínculos epidemiológicos entre cepas, detectando posibles brotes no sospechados, contaminación cruzada en el laboratorio y distinguiendo entre reactivaciones de la enfermedad y posibles
reinfecciones11.
En las últimas décadas se utilizó como gold standard para
la tipi cación genotípica de cepas de M. tuberculosis la
técnica de detección de polimor smos en el largo del
fragmento de restricción IS6110 (IS6110 Restriction
Fragment Lenght Polymor sm -RFLP-), secuencia de
nucleótidos altamente conservada en la especie y
reconocible por enzimas de restricción (endonucleasas),
permitiendo detectar las diferencias entre linajes12. Sin
embargo, esta técnica de ampli cación de ácidos
nucleicos mediante reacción en cadena de la polimerasa
(Polymerase Chain Reaction -PCR-) seguida de digestión
de los fragmentos de ADN mediada por enzimas de
restricción que cortan las hebras de material genético
escindiendo las regiones IS6110 para su posterior estudio,
posee grandes limitaciones en cuanto a tiempos de
reacción y puri cación que pueden llevar semanas, con un
intensivo trabajo en el laboratorio y alta complejidad en la
interpretación de los resultados de los patrones de bandas
obtenidos mediante electroforesis en gel de agarosa11.
La genotipi cación basada en números variables de
repeticiones en tándem (Variable Numbers of Tandem
Repeats – VNTR-) de diferentes clases de elementos
genéticos intercalados en el ADN micobacteriano,
llamados unidades repetitivas intercaladas micobacterianas (Mycobacterial Interspersed Repetitive Units -MIRUs-),
es utilizada cada vez con mayor frecuencia para evitar las
di cultades de la RFLP13. Esta técnica mixta se basa en la
ampli cación de múltiples elementos genéticos del ADN
bacteriano mediante la combinación con sondas de
hibridación (primers) especí cas y la posterior determinación del tamaño de los amplicones mediante electroforesis en capilares o geles o mediante cromatografía
líquida de alto rendimiento (High Performance Liquid
Chromatography -HPLC-)11. Esta exibilidad en la técnica
sumada a la posibilidad de trabajar con extractos crudos
(sin necesidad de digestión mediante enzimas de
restricción) de colonias nacientes en los cultivos la vuelven
considerablemente más rápida que la técnica de RFLP.
Asimismo, la interpretación de los resultados es menos
di cultosa ya que se obtienen códigos numéricos
asociados a cada primer utilizado y la comparación se
torna más sencilla14.
Adicionalmente, la tipi cación genotípica basada en la
detección de espaciadores de oligonucleótidos (Spacer
Oligonucleotide Typing -Spoligotyping-) es una técnica de
PCR rápida y precisa orientada a la detección de un locus
cromosómico especí co, la región “Direct Repeat” (DR),
presente únicamente en las especies del complejo
Mycobacterium tuberculosis. En la especie M. tuberculosis
la región DR se compone de 36 pares de bases separadas
por 43 espaciadores altamente conservados. Mediante la
utilización de primers especí cos dirigidos a la región DR
se produce la primera ampli cación de los espaciadores.
Los oligonucleótidos obtenidos (marcados con moléculas
de biotina) son jados mediante hibridización a una
membrana activada con oligonucleótidos complementarios de secuencia conocida. Posteriormente esta membrana
es incubada en una solución de estreptavidina-peroxidasa.
La combinación de biotina y estreptavidina produce la
liberación de una señal lumínica que puede ser detectada
por autorradiografía o quimioluminiscencia. De este modo
se obtiene a partir de la membrana un patrón de puntos
de hibridación que es comparado con un patrón de los 43
espaciadores conocidos, detectando la presencia o
ausencia de aquellos y permitiendo determinar el linaje de
la cepa en estudio15.
Los datos obtenidos mediante ambas técnicas de
genotipi cación pueden ser ingresados en bases de datos
internacionales para su análisis e interpretación. Shared
International Type (SIT) es una base de datos online
mundial de marcadores moleculares de cepas de M.
tuberculosis16 que otorga una clasi cación o “tipo” de
cepa y permite identi car a qué linaje pertenece. Fue
creada en el año 1997 y cuenta con más de 87.000
aislamientos catalogados, provenientes de 160 países. Esta
información es fundamental a la hora de trazar la evolución y epidemiología de la transmisión de la enfermedad y
de conocer los linajes prevalentes y emergentes en cada
región para proyectar futuras expansiones.
De esta manera, la combinación de técnicas rápidas y de
sencilla aplicación permite la identi cación genotípica de
cepas de M. tuberculosis con alta especi cidad y precisión.
El objetivo del presente trabajo es caracterizar genotípicamente las cepas de Mycobacterium tuberculosis aisladas
enfermedad en esa población
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