Desarrollo de métodos de búsqueda de inhibidores de palmitoiltransferasas
Date
2021-08-01Author
Coronel, Consuelo
Advisor
Valdez Taubas, Javier
Metadata
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Resumen: La S-acilación es una modificación postraduccional de proteínas que se caracteriza por el agregado de un ácido graso de cadena larga a una cisteína. El ácido graso que más frecuentemente es añadido es el palmítico por lo cual esta modificación también se conoce como palmitoilación. Una de sus principales características es la reversibilidad, la cual le confiere capacidad regulatoria. La S-acilación ha sido relacionada a importantes procesos como la transducción de señales, la transmisión sináptica y el ciclo visual.
La S-acilación es catalizada por una familia de enzimas llamadas S-aciltransferasas o palmitoiltransferasas (PATs). Son proteínas politópicas de membrana con entre 4 y 6 pasos transmembrana y se caracterizan por tener un dominio conservado denominado DHHC (Asp, His, His, Cys), rico en cisteínas. Fueron descriptas inicialmente en la levadura Saccharomyces cerevisiae donde se encontraron 7 miembros de la familia, pero están conservadas en todos los organismos eucariotas. A pesar de que existe un creciente interés en estas enzimas debido a que cada vez hay más evidencia de su rol en la salud humana, el campo aún carece de inhibidores específicos para las palmitoiltransferasas. Obtenerlos permitiría avanzar en el entendimiento de los mecanismos de acción y las funciones de estas enzimas, pero también podrían ser de importancia para el tratamiento de algunas enfermedades.
Durante el desarrollo de esta tesis se trabajó en el diseño, implementación y optimización de dos métodos biológicos “in vivo” para la búsqueda de inhibidores de estas enzimas. Utilizando como organismo modelo a la levadura S. cerevisiae se trabajó en generar nuevas cepas que tuvieran un crecimiento diferenciado en presencia o ausencia de una de las PATs endógenas, Akr1. Posteriormente se pusieron a punto dos ensayos diferentes para rastrear a gran escala posibles inhibidores de esta PAT. El primer ensayo tuvo como objetivo identificar péptidos inhibidores, mientras que el segundo estuvo dirigido a conseguir drogas inhibitorias. Además, confirmamos que estos sistemas biológicos también pueden ser utilizado para la búsqueda de inhibidores de PATs de otros organismos cuya inhibición pueda revestir mayor interés para la salud humana.
A lo largo de la tesis se realizó un desarrollo biotecnológico que sienta las bases para continuar la búsqueda de inhibidores, que aquí se inicia, pero que aún no ha finalizado. Nuestra meta es obtener un inhibidor plenamente funcional y una profunda caracterización del mismo.
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