Análisis de la variabilidad intraespecífica en Trypanosoma cruzi: susceptibilidad a la combinación de benznidazol y clomipramina durante la infección aguda experimental.

Abstract

La especie Trypanosoma cruzi, causante de la enfermedad de Chagas, está compuesta por diversas subpoblaciones que exhiben un alto grado de polimorfismo cuando son analizadas por métodos bioquímicos y moleculares, presentando distintas características biológicas y comportamiento frente a la acción de fármacos. Estas subpoblaciones, han sido agrupadas en seis unidades discretas de tipificación (UDT) o linajes denominados TcI - VI. La variabilidad genética del parásito en un mismo huésped podría presentar un tropismo diferencial a los distintos órganos del mismo. En el presente trabajo se determinaron los linajes presentes en tres aislamientos de T. cruzi (dos obtenidos de individuos con infección con T. cruzi congénito, Casibla y Lucky; y uno a partir de un Triatoma infestans de Santiago del Estero, SGO-Z12). Como así también se evaluó, el efecto de la combinación de fármacos (benznidazol [Bz] y clomipramina [Clo]) in vitro e in vivo sobre los linajes de T. cruzi pertenecientes a los 3 aislamientos. Se realizaron diferentes métodos de tipificación previamente descriptos, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR en tiempo real y enzimas de restricción. Para determinar el efecto combinado de las drogas in vitro se incubaron tripomastigotes de T. cruzi pertenecientes a los 3 aislamientos, administrando las drogas en forma individual y asociadas. Para el estudio in vivo se infectaron 108 ratones separados en tres grupos con cada aislamiento y se los dividió en distintos esquemas de tratamiento que incluyeron la combinación de Bz+Clo. La eficacia de la fármacoterapia se evaluó a través de la sobrevida de los ratones hasta los 35 días post infección, cuantificación de parásitos en sangre y tipificación de los linajes presentes en sangre, músculo cardíaco y esquelético. Se determinó que los tres aislamientos naturales de T. cruzi están compuestos por una mezcla de linajes TcII y TcVI. La distribución de los linajes en los tejidos infectados no fue homogénea, encontrándose variaciones entre los animales analizados. La combinación de Bz+Clo in vitro, presentó un efecto sinérgico sobre los tres aislamientos de T. cruzi. El tratamiento in vivo con Bz+Clo disminuyó la carga parasitaria en relación al grupo infectado no tratado (p<0,05), presentando menos efectos adversos (alteraciones histológicas en hígado y riñón) que aquellos tratados con Bz. Con respecto al efecto del tratamiento sobre la distribución de los linajes de T. cruzi, se observó diferente sensibilidad de los mismos, ya que algunos no fueron detectados. En base a los resultados obtenidos, se reafirma la complejidad en el abordaje del tratamiento de la enfermedad de Chagas. Nuestros resultados demuestran que para valorar la efectividad de la terapéutica se debería tener en cuenta la variabilidad que posee el T. cruzi y sus diferentes susceptibilidades frente al tratamiento. Por otro lado, la combinación de fármacos con diferentes mecanismos de acción y acción sinérgica, podría provocar menos efectos adversos en el huésped al disminuir las dosis y a su vez aumentar su efectividad.