Via secretoria de proteinas : estudio de la actividad reguladora de la gtpasa rab1b

Abstract

transporte intracelular de proteínas es una actividad esencial para las células eucariotas. Mediante este proceso se llevan a cabo numerosas actividades importantes para la viabilidad celular y para la integración de la célula con el medio que la rodea. Existen dos vías principales de transporte: las Vías Endocíticas y las Vías Secretorias. Las primeras comprenden los intermediarios de transporte (vesículas y/o túbulos) que emergen de la membrana plasmática hacia el interior celular (lisosomas, endosomas, fagosomas, etc.), mientras que las segundas comprenden la salida de proteínas nacientes desde el retículo endoplásmico (RE) hacia el complejo de Golgi y luego a la membrana plasmática. En general, todas las etapas que componen estas vías ocurren mediante un mecanismo común que consiste en la generación de intermediarios de transporte a partir de un compartimiento dado, el transporte de dicho intermediario, y su posterior fusión con un compartimiento receptor. Para asegurar la correcta distribución de las proteínas en los compartimientos adecuados existen un gran número de factores y proteínas encargados de regular, dirigir y brindar especificidad a cada una de las etapas del transporte intracelular, entre los que se encuentran proteínas de cubierta, factores de reconocimiento de membranas, SNARES, Arf GTPasas, Rab GTPasas, etc. En el presente trabajo de tesis se analizaron los mecanismos mediante los cuales la GTPasa Rab1b regula el transporte de proteínas entre el retículo endoplásmico y el complejo de Golgi. Para ello se analizó el comportamiento dinámico del ciclo de Rab1b, el rol de Rab1b en el reclutamiento de COPI, y la relación entre la función de Rab1b y la estructura del complejo de Golgi. Mediante ensayos de microscopía confocal in vivo se observó que Rab1b se asocia al complejo de Golgi y a los sitios de salida del retículo endoplásmico directamente desde las reservas citosólicas, y que permanece unida a sus sitios de acción de manera transitoria. Además, ensayos bioquímicos y de inmuno-fluorescencia nos permitieron caracterizar a GBF1 como una nueva proteína efectora de Rab1b y determinar que esta interacción es esencial para el reclutamiento del complejo COPI y, por consiguiente, para la maduración de los intermediarios de transporte provenientes del retículo endoplásmico. Por último, mediante ensayos de microscopía electrónica se evidenció que la función de Rab1b es vital para el mantenimiento de la estructura del Golgi sugiriendo que cambios en los niveles de Rab1b podrían ser importantes para el proceso de adaptación del Golgi en función de los distintos requerimientos celulares.