Papel del gen PLAGL1 en carcinoma hepatocelular
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Date
2017Author
Vega Benedetti, Ana Florencia
Advisor
Parada, Luis Antonio
Metadata
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El gen PLAGL1 codifica para una proteína homónima que regula el arresto del
ciclo celular y la apoptosis, por lo que es considerado un gen supresor de
tumores. Esta regulación ocurre a través de vías de señalización que incluyen
p53 y PPARγ, los cuales inducen p21, que es un importante regulador del ciclo
celular. Se ha demostrado que las pérdidas genómicas de la región
cromosómica donde mapea PLAGL1 (6q24) en ocasiones están asociadas con
metilación anormal del alelo remanente y que esto conduce a una disminución
de la expresión de la proteína. La hipótesis de trabajo fue que si bien las
alteraciones conducentes a desbalances genómicos tienen un rol en el
desarrollo tumoral, otros cambios, tales como los epigenéticos podrían
influenciar en la expresión de PLAGL1 y por consiguiente en el papel de la
proteína en el desarrollo del carcinoma hepatocelular. Para estudiar la relación
entre PLAGL1 y hepatoma, en primer lugar se caracterizaron desde el punto de
vista citogenético cuatro líneas tumorales de hígado (PLC/PRF/5, SkHep1,
Huh7 y HepG2), utilizadas como modelo experimental in vitro y también diez
muestras de tumores frescos mediante array-CGH. Estos ensayos mostraron
que pérdidas genómicas de la región donde mapea PLAGL1 son frecuentes en
hepatomas. También se investigó el estado de metilación del promotor P1 de
PLAGL1 mediante PCR-metil-específica y se determinó un porcentaje de
metilación superior al 50% en las cuatro líneas tumorales. A continuación, se
determinó el nivel de mARN y proteínas de PLAGL1, mediante RT-qPCR y
Western blot respectivamente, conjuntamente con el de p53, PPARγ y p21,
durante la proliferación de células de hepatomas. Estos experimentos
mostraron en general que la transcripción y expresión de PLAGL1 es menor en
células tumorales que en fibroblastos normales usados como control. Además,
se encontró que durante proliferación, los fibroblastos sufren una marcada
disminución transitoria y posterior aumento gradual de los niveles de mARN y
proteína de PLAGL1, p53 y p21 que sugiere una participación conjunta y
orquestada en el control del crecimiento normal. Por el contrario, los niveles
uniformemente bajos de mARN y de la proteína PLAGL1 obtenidos en los
ensayos de proliferación de líneas celulares tumorales indican que se establece
una dinámica diferente en la regulación de la elevada proliferación de las
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células tumorales e indirectamente sugieren que PLAGL1 juega un papel en
hepatocarcinogénesis. Estos resultados motivaron la realización de ensayos de
transfección con una construcción genética que contiene la secuencia completa
del gen PLAGL1, y se encontró que las transfecciones causaron incremento de
la expresión de PLAGL1 y p21. Mediante recuento celular y citometría de flujo
se detectó una disminución del número de células totales y del porcentaje de
células en G2/M, sin embargo el efecto inhibitorio sobre el crecimiento celular
no alcanzó niveles de significancia estadística.
En resumen, los resultados del trabajo de tesis doctoral demuestran que
PLAGL1 podría ejercer un papel en la proliferación de células tumorales
hepáticas y sugieren que el mecanismo de señalización en el que interviene
durante hepatocarcinogénesis es complejo.